AAT Bioquest  21180  Cell Meter™ 熒光細胞內 pH 測定試劑盒

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AAT Bioquest 熒光細胞內pH測定試劑盒

美國AAT Bioquest Inc.(前身是ABD Bioquest，Inc.)是一家為從事生命科學研究、診斷研發(fā)及藥物開發(fā)的科學家研發(fā)、生產和銷售生物分析研究試劑和試劑盒的公司。公司致力于光譜學檢測領域，包括吸收（顏色），熒光和發(fā)光技術。AAT Bioquest的產品幫助 quan 世 jie 的科學家和生物醫(yī)藥研究者更好的了解生物化學，免疫學，細胞生物學和分子生物學等領域。AAT Bioquest會不斷介紹新產品，快速的豐富各個領域的產品。

AAT Bioquest  21180  Cell Meter™ 熒光細胞內 pH 測定試劑盒  1000 Tests，產品簡介：

產品品牌：AAT Bioquest

產品貨號：21180

產品名稱：Cell Meter™ 熒光細胞內 pH 測定試劑盒

產品規(guī)格：1000 Tests

AAT Bioquest 熒光細胞內pH測定試劑盒 

AAT Bioquest  21180  Cell Meter™ 熒光細胞內 pH 測定試劑盒  1000 Tests，產品說明：

細胞內pH值變化與多種生理和病理過程有關，包括細胞增殖，細胞凋亡，受精，惡性腫瘤，多藥耐藥性，離子轉運，溶酶體貯積癥和阿爾茨海默病。細胞計™熒光法細胞內pH測定試劑盒利用AAT Bioquest專有的熒光指示劑來測量細胞內pH值的相對變化。它是一種均質的動力學活細胞熒光測定，采用標準程序或酸負荷程序。標準方案設計用于測量感興趣的治療靶點，治療時細胞內pH值降低。“酸負荷"程序旨在測量與GPCR活化或生長因子活性引起的細胞代謝變化相關的細胞內pH值的增加。通過“酸負荷"程序，在熒光pH染料以最小體積加載到細胞中后，加入氯化銨溶液。該“酸加載"步驟之后在相對大體積（~4X）的緩沖液中添加激動劑。突然的體積變化引發(fā)細胞中的氨（NH3）外排，導致細胞內pH值迅速降低，從而降低熒光信號。激動劑對細胞內pH后續(xù)恢復的影響通過相對熒光信號增加來測量。

平臺

熒光酶標儀

Excitation：490納米

Emission：535納米

Cutoff：515納米

推薦板：黑色墻壁/透明底部

組件

組件A：RatioWorks™ BCFL，AM     1瓶

組件B：10X Pluronic F127 Plus   1 瓶 （10 mL）

組分C：HHBS（Hanks緩沖液，含20 mM肝素）     1 瓶 （100 mL）

組分 D：50 mM 準備使用™probenecid  1 瓶 （10 mL）

用于標準電池負載（單板）

1.    在生長培養(yǎng)基中制備細胞

2.    加入等體積的RatioWorks™ BCFL，AM染料加工溶液

3.    在37°C孵育1小時

4.    在Ex/Em= 490/535 nm（截止= 515 nm）下讀取熒光，加入50 μL/孔化合物（或比率為500/530 nm和440/530 nm）

協議摘要

用于酸負荷（一個 96 孔板）

1.    在生長培養(yǎng)基中制備細胞

2.    去除生長培養(yǎng)基

3.    添加 RatioWorks™ BCFL、AM 染料工作溶液（50 μL/孔/96 孔板）

4.    在 37°C 下孵育 1 小時

5.    添加 220 mM NH₄氯（5 μL/孔）

6.    在室溫下孵育 15 分鐘

7.    在Ex/Em= 490/535 nm（截止= 515 nm）下讀取熒光，加入200 μL/孔化合物（或比率為500/530 nm和440/530 nm）

重要事項：在開始實驗之前，在室溫下解凍所有試劑盒組分。

儲備溶液的制備

除非另有說明，否則所有未使用的儲備溶液應分成一次性等分試樣，并在制備后儲存在-20°C。避免反復凍融循環(huán)。

RatioWorks™ BCFL， AM 庫存解決方案

將 200 μL DMSO 加入 RatioWorks BCFL、AM（組分 A）的小瓶中，并充分混合以制成 RatioWorks™™ BCFL、AM 儲備溶液。

注意 20 μL 重構 RatioWorks™ BCFL、AM 儲備溶液足以用于 1 板標準細胞負載。10 μL 重構 RatioWorks™ BCFL、AM 儲備溶液足以用于 1 板酸負荷。RatioWorks™ BCFL，AM儲備溶液可以儲存在≤-20oC 如果管子密封嚴密，則一個月。避光。

工作溶液的制備

1. 用于標準電池負載（單板）

1. 將 1 mL 的 10X Pluronic F127 Plus（組分 B）加入 9 mL 的 HHBS（組分 C）中，充分混合制成 1X 測定緩沖液。

注意對于需要丙磺shu上樣的細胞（例如CHO細胞），稀釋50 mM準備以™ 1至5 mM的濃度使用丙磺shu（組分D）（CHO細胞 shou xuan 5 mM）。

2. 將 20 μL 重構的 RatioWorks BCFL、AM 儲備溶液加入 10 mL 的 1X 測定緩沖液中，充分混合，制成 RatioWorks™™ BCFL、AM 染料工作溶液。該RatioWorks™ BCFL，AM染料工作溶液在室溫下可穩(wěn)定至少2小時。

2. 用于酸負荷（一個 96 孔板）

1. 將 1 mL 的 10X Pluronic F127 Plus（組分 B）加入 4 mL 的 HHBS（組分 C）中，充分混合制成 1X 測定緩沖液。

注意對于需要丙磺shu上樣的細胞（例如CHO細胞），稀釋50 mM準備以™ 0.5至2.5mM的濃度使用丙磺shu（組分D）（CHO細胞 shou xuan 2.5 mM）。

2. 將 10 μL 重構的 RatioWorks BCFL、AM 儲備溶液加入 5 mL 的 1X 測定緩沖液中，充分混合，制成 RatioWorks™™ BCFL、AM 染料工作溶液。該RatioWorks™ BCFL，AM染料工作溶液在室溫下可穩(wěn)定至少2小時。

實驗方案樣本

運行標準細胞載量pH測定

1.    將 100 μL/孔（96 孔板）或 25 μL/孔（384 孔板）RatioWorks™ BCFL、AM 染料工作溶液添加到細胞板中。

注意 如果您的化合物干擾血清，請務 bi yong  HHBS 緩沖液替換生長培養(yǎng)基（100 孔板為 96 μL/孔，染料上樣前為 25 孔板為 384 μL/孔）。

2.    將染料加載板在細胞培養(yǎng)箱中孵育30分鐘，然后在室溫下再孵育板30分鐘。

注意如果測定需要37°C，請立即進行實驗，無需進一步室溫孵育。

3.    使用 HHBS 或所需的緩沖液制備復合板。

4.    通過監(jiān)測Ex / Em = 490 / 535 nm（截止= 515 nm）或500/530 nm和440/530 nm（截止= 515 nm）的熒光進行比率測量來運行pH測定?；衔锾砑恿繛?span> 50 μL/孔（96 孔板）或 25 μL/孔（384 孔板）。

注意 該測定應在化合物添加后 3 至 5 分鐘內完成，但建議在測定開發(fā)期間至少收集 8 分鐘的數據。

運行酸負荷的pH測定

1.    從細胞板中取出生長培養(yǎng)基。

2.    將 50 μL/孔/96 孔板 RatioWorks™ BCFL、AM 染料工作溶液添加到細胞板中。

3.    將染料加載板在細胞培養(yǎng)箱中孵育30分鐘，然后在室溫下再孵育板30分鐘。注意：如果測定需要37°C，請立即進行實驗，無需進一步室溫孵育。

4.    加入 5 μL 220 mM NH4Cl 并將板離心 5 秒鐘。在室溫下孵育15分鐘。

注意新罕 bu shen 爾州4Cl溶液應在HHBS（組分C）中新鮮制備。

5.    使用 HHBS 或所需的緩沖液制備復合板。

6.    通過監(jiān)測Ex / Em = 490 / 535 nm（截止= 515 nm）或500/530 nm和440/530 nm（截止= 515 nm）的熒光進行比率測量來運行pH測定?；衔锾砑恿繛?span> 200 μL/孔/96 孔板。

注意 該測定應在化合物添加后 3 至 5 分鐘內完成，但建議在測定開發(fā)期間至少收集 8 分鐘的數據。

產品訂購信息：

21180  Cell Meter™ 熒光細胞內 pH 測定試劑盒  1000 Tests